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【色谱】利用色谱法测定食品中可溶性磷酸盐含量

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2019-06-24 10:23
来源:苏州苏震生物工程有限公司
钱娟娟
1845

  采用色谱法测定可溶性磷酸盐含量。由聚苯乙烯二乙烯苯树脂填装而成的Aminex HPLC 柱,通过离子调节分配层析技术,在特定的色谱条件下,将可溶性磷酸盐以PO43-形式被检测出来,并用外标法定量。

  磷酸盐常被作为重要的食品配料和功能添加剂,然而膳食中磷酸盐食量过多,会降低人体对钙的吸收,造成缺钙。同时,磷酸盐又是引起水体富营养化的关键因素之一,是评价水体水质的重要指标。所以对于可溶性磷酸盐的测定显得尤为重要。目前实验室广泛采用的测定磷酸盐的方法——钼锑抗分光光度法,虽然操作简单,但其络合物稳定时间短,检测限高,灵敏度低,不利于样品中微量磷的测定。

  为了提高检测灵敏度,降低检测限,本方法采用由聚苯乙烯二乙烯苯树脂填装而成的Aminex HPLC 柱,通过离子调节分配层析技术(包括离子排阻、离子交换、正相和反相分配、分子量排阻和配体交换),在特定的色谱条件下,将可溶性磷酸盐(包括H2PO4-、HPO42-、PO43-)以PO43-形式被检测出来,并用外标法定量。

  实验部分

  仪器与试剂

  1.仪器

  高效液相色谱仪,分析条件,如表1所示。

  2.试剂

  磷酸二氢钾:GB/T 1274-2011

  高纯水: MILLI-Q超纯水器制备

  实验步骤

  1.制作标准曲线

  称取0.0266g分析纯磷酸二氢钾(99%),用适量水溶解后转移至100ml容量瓶中,定容后混匀,称为磷酸二氢钾标准母液。取7个1.5ml的离心管分别编号为1、2、3、4、5、6、7,按表2所示,将磷酸二氢钾标准母液稀释成7个浓度梯度。

  2.绘制标准曲线

  将上述标准系列置于离心机中离心,从低至高浓度依次进样,进样体积为20ul,得到不同浓度磷酸盐的色谱图,如图1所示。记录7个梯度的磷酸盐浓度(以PO43-计,g/L)对应的峰面积数值,如表3所示,以磷酸盐的浓度(以PO43-计,g/L)为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,如图2所示。

  标准曲线的相关系数R2达到0.9994,符合线性要求,从而得到磷酸盐浓度(以PO43-计,g/L)的计算公式如下:

  Y = aX + b

  式中:

  Y —— 峰面积

  X ——磷酸盐的浓度(以PO43-计,g/L)

  a —— 119426

  b —— 0

  3.样品测定

  称量一定量的样品,加高纯水溶解,在100ml容量瓶中定容,混匀。(控制稀释后样品中的PO43-浓度不超过标准曲线的最大测量范围)将稀释后的样品离心,取上清液,进色谱分析得到结果。

  结果与讨论

  1.准确度验证

  向10个不同的样品中添加一定量的标准样品,色谱分析得到结果,计算加标回收率,回收率为96.67%~100.67%,平均值为98.67%,都在可接受的范围内,证明该实验方法符合要求的准确度,如表4所示。

  2.精密度验证

  6个样品分别重复进样6次,色谱分析得到结果,计算相对标准偏差,六组相对标准偏差数据本实验测定的相对标准偏差为0.1%~0.34%,平均值为0.19%,证明该实验方法符合要求的精密度,如表5所示。

  结论

  本实验利用色谱仪灵敏度高、检测限低、精密度高的特点,建立了一种色谱法测定食品中可溶性磷酸盐,操作简单方便、用时短,并且通过准确度和精确度实验,验证了该方法的可行性。

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