LaborPraxix LaborPraxis Vogel 弗戈工业传媒 Vogel 弗戈工业传媒 /注册 登录
首页 >技术干货 >色谱

【色谱】小耗材大智慧之液相色谱柱

收藏本文
2019-01-08 16:36
来源:实验与分析
老赵头
1133

  色谱柱在液相系统中起着分离的作用,是液相色谱系统的核心部件之一。柱管材质有玻璃、不锈钢、铝铜、peek以及内衬光滑的聚合材料的其他材质。一般细粒度的填料采用匀浆填充法装柱,先将填料调成匀浆,在高压泵作用下,快速将其压入装有洗脱液的色谱柱内,经冲洗后备用。

 

  老赵头上学的时候也装过层析柱,由于技术不过关,装出来的柱子里面经常有气泡,实验效果不好。柱子装填的效果对柱效影响很大。如何使用色谱柱使实验顺利进行,这就需要对色谱柱做一下深入的了解了。

  一、液相色谱柱结构

 

  一般的液相色谱柱由柱管、柱头螺母、死堵、筛板、还有里面的填料组成。不同品牌的构造略有不同。

  二、液相色谱柱的分类

 

  液相色谱柱分类多样主要有以下分类方式

 

  按照固定相基质分:无机氧化物(常用硅胶、氧化铝)、聚合物基质(常用DVB、PS-DVB、PHAM等)和全石墨化碳色谱柱等。

 

  按结构和形状分:全多孔硅胶柱和核壳柱,无定型和球形,整体柱

 

  按分离模式分:正相、反相、离子交换、体积排阻、亲和、手性等

 

  按照分离规模和色谱柱尺寸分:制备柱、分析柱、微型柱、毛细管柱等。

 

  三、柱性能评价

 

  色谱柱的类型和构型(粒径、内径、长度、碳载量、孔径等)选择通常有分离的目的决定,对特定类型的色谱柱,不同品牌不同系列之间差异很大。表征色谱柱性能的参数主要有:理论塔板数、不对称因子、对两种不同溶质的选择性、色谱柱的反压、保留时间的重现性、键和相浓度、色谱柱的稳定性等。一般色谱柱出厂COA报告包含其中比较关键的项目。

 

  四、常用色谱柱

 

  我们常见的色谱柱品牌有waters、安捷伦、赛默飞、岛津、shodex、大赛璐、还有被大曹三耀收购的资生堂,国内品牌比较出名的就是月旭、依利特了。

  我们再看看各种各样的键和相都是啥。

  这么多的键和相到底应该怎么选,有没有规律呢,必须有啊,往下瞅瞅。

 

  又想起了化学老师那句万能的箴言:“结构决定性质,性质决定用途。”结构和性质还决定了这伙计需要用什么柱子分离。

  了解被分离物有何区别?有无可电离集团?电离常数?PH如何影响色谱分析?比如下图PH对分离的影响。

  常规的硅胶基质色谱柱不能耐受高PH,可以选择杂化硅胶颗粒或者聚合物基质的色谱柱,多点键和的色谱柱在高PH下也会比单点键和的色谱柱寿命更长。下图便是某位小姐姐家的色谱柱在高PH下硅胶溶解的图片。

  五、如何更好的使用色谱柱,延长柱寿命?

 

  1、拿到色谱柱后先阅读说明书,了解色谱柱的具体性能:耐受温度、耐受PH等。以及色谱柱的冲洗和保存条件。经过柱校测试确认色谱柱本身没有问题后方可正常使用。

 

  2、样品充分前处理,确保样品的洁净;使用保护柱或在线过滤器,根据实际情况更换保护柱芯或滤片。

 

  3、避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。

 

  4、应逐渐改变溶剂的组成,特别是反相色谱中如果流动相中使用了缓冲盐,避免出现盐析。

 

  5、选择使用适宜的流动相(尤其是pH),以避免固定相被破坏,PH过低共价键断裂,键和相水解;PH过高硅胶溶解。

 

  6、色谱柱使用过程中,如果压力升高,或出现污染,选择适当的条件冲洗或反冲。

 

  适用于C18、C8、C4、C1、苯基、PFP、AQ等

 

  使用至少20倍柱体积的含有≥30%谁的极性邮寄溶剂(如乙腈)作为流动相除去柱子中的缓冲盐;使用至少20倍柱体积的含有95%极性邮寄溶剂(如乙腈)冲洗色谱柱。

 

  污染物的去除常规星期后柱校没有明显恢复时,使用50%异丙醇/乙腈以低流速清洗20倍柱体积以除去污染物。(以上操作可根据实验室自身SOP视情况而定,此方法仅为赛默飞针对自己品牌的反相色谱柱冲洗的参考意见)

 

  适用于氨基柱、氰基柱

 

  常规清洗:乙腈:水=60;40条件对色谱柱进行冲洗,清洗时不建议水相比例超过40%,过高使用水相容易导致键和相水解。

 

  色谱柱再生:当色谱柱经过长期使用,柱校降低时,可以对色谱柱进行再生,乙腈:水(水中加入0.05%氨水)=60:40条件冲洗30倍柱体积。(以上操作可根据实验室自身SOP视情况而定,此方法仅为赛默飞针对自己品牌的色谱柱冲洗的参考意见)

 

  适用于离子交换柱SCX、SAX冲洗方法

 

  日常冲洗:用100%水冲洗30个柱体积除盐,然后用20%甲醇或乙腈冲洗20个柱体积后保存在20%甲醇或乙腈中。

 

  长期保存:用100%水冲洗30个柱体积去除盐,然后用50%乙腈;50%水冲洗20个柱体积后保存在50%乙腈:50%水中。

 

  再生:先用高浓度的缓冲盐(不超过1M),然后再用100%水洗,100%乙腈或甲醇冲洗,再用20%乙腈或甲醇保存。(以上操作可根据实验室自身SOP视情况而定,此方法仅为赛默飞针对自己品牌的色谱柱冲洗的参考意见)

 

  色谱柱是个很厉害的角色,

 

  希望有机会我们一起探讨!

查看更多内容请登录
购买
发表评论
嗅友XXX
默认评论 | 最新评论

技术干货

前沿仪器——多参数水质分析仪 2017(第二期)实验室安全知识及... 北京将开展人工消减雾霾科学试... 75项食品安全国家标准发布 食品安全 人人参与 超声给药或可逆转肿瘤多药耐药 “悦动指尖·纯水传奇” - 默克... 定了!半个月后这些生物制药届重...

知名厂商