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【色谱】快来领取你的手动积分指南

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2019-01-29 14:41
来源:实验与分析
实验与分析
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  色谱积分方法,最近几年控制的比较严格,部分规定任何的积分方法修改都要经过批准。而手动积分又是实验室经常面临的问题,所以,何时可以手动积分?如何进行手动积分?这些一直以来都是色谱分析工作者最头疼的问题,今天小析姐就和你一起啃掉这块“硬骨头”。

  一、定义

  1、积分

  指在信号中确定峰并计算其大小,积分包括以下操作及步骤:识别、校正、定量。

  2、积分事件的参数控制

  对于某个信号进行积分时,软件将识别每个峰的开始和结束时间,并用竖线标记这些点,寻找每个峰的峰顶点,确定保留时间/迁移时间,建立基线,以及计算每个峰的峰面积、峰高和峰宽。这些过程积分事件的参数控制。

  3、自动积分

  自动积分功能为设置初始事件提供开始点。自动积分功能设置以下参数:初始斜率灵敏度(阈值)、初始峰高、初始峰宽、初始最小峰面积。

  4、手动积分

  此类型的积分允许对选定的峰或峰组进行积分,在指定的手动积分范围内,将忽略此软件的事件积分(初始最小峰面积除外)。如果手动积分出来的一个或多个峰低于最小峰面积阈值,则此积分将被废弃。手动积分时间使用绝对时间值。它们不会为信号漂移作调整。在报告中,手动积分提供以下功能:

  § 划基线:指定为一个峰或一组峰划基线的位置;

  § 负峰:指定何时将基线以下的面积当作负峰处理;

  § 切线撇去:计算从主峰切线撇去的峰面积;

  § 分裂峰:指定用垂线分裂峰的点;

  § 删除峰:从积分结果中删除一个或多个峰。

  二、积分参数

  自动积分主要是修改以下4个积分参数实现的,具体如下:

  1、斜率灵敏度(Slope Sensitivity)

  也称阈值,指设置信号斜率的值,该斜率用于识别积分过程中峰的起点和终点。如何信号斜率大于“斜率灵敏度”值,将建立峰起点,如果信号斜率降到“斜率灵敏度”以下,将建立峰止点。

  设置值越低,峰响应越灵敏,当然,不同品牌的仪器对设置值的响应程度会有所区别。

  2、峰宽值(Peak Width)

  用于控制积分器的选择性以区分峰与基线噪音。如果设置的初始峰宽太小,则可能将噪音当作峰。如果宽峰与窄峰混在一起,可以选用运行时间编程事件设定特定的峰宽。

  3、最小峰面积值(Area Reject)

  根据峰面积来设置小于目标峰面积的峰将不被积分也不会报告;

  4、最小峰高(Height Reject)

  最小目标峰的高度,任何小于最小峰高的峰将不被积分及报告。

  三、什么情况下可以进行手动积分?

  1.低分离度或低响应;

  2.流动相不稳定,基线紊乱,保留时间变化小;

  3.运行过程中,出现异常峰;

  4.软件积分的局限性,如由于软件参数阈值的设置导致峰未积分,峰起点和终点间出现肩峰和异常的基线漂移,软件错误;

  5.由于样品母体的干扰导致的复杂色谱图,裂峰、目标杂质的同时洗脱/肩峰、基线噪音、负峰、基线上升或下降、峰的严重拖尾、烃类的存在导致自动积分不正确。

  四、积分原则

  1、关于手动积分

  能进行手动积分吗?答案是肯定的,可以进行手动积分,但手动积分必须在受控的情况下进行。一般情况下,应采用自动积分方式,不可以手动积分。特殊情况下,若是目标峰实在无法自动积分的,即对于采取高级积分的方式还不能将峰有效的积分,经申请与批准后,可以进行手动积分。此外必须严格控制手动积分次数,因为如果一套好的分析方法,峰与峰之间分离较好,根本是不需要手动积分,如果需要手动积分的图谱,分析方法必定不好。

  2、关于忽略限

  单个杂质及总杂质的定量测定,选择合适的阈值设置和合适的条件进行积分是很重要的。这种情况下,峰值可忽略通常设为0.05%。因此,数据采集系统的阈值设置至少相当于这个限制的一半(0.025%)。对任何未与主峰完全分离的杂质进行积分,最好采用峰谷对峰谷外推法(切向撇去法)。”

  3、关于积分方法是否需要固定

  积分方法是否需要固定?个人认为应该分情况,分析方法验证期间时积分参数摸索期,通过整套分析方法验证过程来确定积分参数,这期间没有修改积分参数之说,因为本身就没有积分方法。放行检测的积分方法可以先根据验证情况进行确定,之后所有检测的积分方法应该是固定,任何修改积分参数的行为应该进行申请,批准后方可修改。

  稳定性考察为了反映杂质的趋势,积分方法可以与放行方法不同,但不同时间点的积分方法应该相同,任何修改,同样需要申请及批准。

  4、积分方法的审计追踪

  目前的色谱系统,均有审计追踪,当我们对积分方法进行修改时,均会出现“comment”,要求输入具体的修改内容。

  五、手动积分注意事项

  1.手动积分不能试图通过以下动作来使数据符合标准要求:减少峰(减少峰面积)、增加峰(增加峰面积)、改变峰高;

  2.同一次检验的所有标准品、对照品、样品等必须使用同一方法进行手动积分;

  3.手动积分结束后,应打印自动积分图谱和手动积分图谱附于手动积分申请表之后,提交QC经理审核;

  3.自动积分的图谱不得删除或被覆盖,应与手动积分图谱保存于计算机中,打印的自动积分图谱和手动积分图谱应标识清楚签名,随同手动积分申请表附于检验原始记录后面一起交质量管理部经理、QP审核无问题后归档。

  4.研发和生物实验室可能需要手动积分。尽管对于QC实验室,手动积分可能仅在特殊情况下是必需的或可接受的;但手动积分还是不适合应用于分析检测实验室。手动积分只有在得到主管书面批准且结果正确记录后,根据批准程序才能进行,而不应该由分析师自行决定。

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